液氮冷冻保藏技术分享

近年来，很多有特殊意义和特征的高级动、植物细胞能够在液氮中长期保藏，并发现在液氮中保藏的菌种的存活率远比其他保藏办法高且回复突变的发生率极低。

液氮罐厂家了解液氮保藏巳成为工业微生物菌种保藏的*好办法。（而让液氮保持效果，便于运输，储存离不开 液氮罐）具体办法是：把细胞悬浮于必定的分散剂中或是把在琼脂培育基上培育好的菌种直接进行液体冷冻，然后移至液氮(-196 ℃)或其蒸汽相中(-l56 ℃)保藏。

液氮冷冻保藏技术分享

进行液氮冷冻保藏时应严格控制致冷速度。

液氮冷冻保藏微生物菌种的过程是先制备冷冻保藏菌种的细胞悬液，分装0.5～1 mL入玻璃安瓿或液氮冷藏专用塑料瓶，玻璃安瓿用酒精喷灯封口。 然后以(1-2) ℃/min的致冷速度降温，直到温度到达相对温度之上几度的细胞冻结点(通常为-30 ℃)。

待细胞冻结后，将致冷速度降为1 ℃/min，直到温度到达-50 ℃，将安瓿迅速移入 液氮罐中于液相(-196 ℃)或气相(-156 ℃)中保存。如果无控速冷冻机，则一般可用如下办法替代：

将安瓿或液氮瓶置于-70 ℃冰箱中冷冻4 h，然后迅速移入液氮罐中保存。在液氮冷冻保藏中，*常用的冷冻保护剂是二甲亚砜和甘油，*终运用浓度一般为甘油10 %、二甲亚砜5 %。

所运用的甘油一般用高压蒸汽灭菌，而二甲亚砜*好为过滤灭菌。